Analyse av tryptaminer i fullblod med UHPLC-MS/MS

Abstract

Tryptaminer er en undergruppe av nye psykoaktive substanser (NPS) med økende forekomst i senere år. I tillegg kan en fornyet interesse for medisinsk bruk av tryptaminer føre til økt bruk i samfunnet. Dette gjør det aktuelt med metoder for analyse av tryptaminer. En Ultra-High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry (UHPLCMS/MS)-metode ble utviklet for separasjon og deteksjon av 21 tryptaminer. Kromatografisk separasjon av analyttene ble utført ved omvendtfasekromatografi i bifenyl-kolonne (2,1 mm x 100 mm, 1,8 µm partikler) med kolonnetemperatur på 60 °C, mobilfase (MF)-hastighet på 0,5 mL/min, injiseringsvolum 1,5 µL og gradient eluering på 7,5 min med 10 mM ammounimformatbuffer med pH 3,1 og metanol som organisk løsemiddel. Deteksjon ble utført med elektrosprayionisering (ESI) i positiv modus og med multiple reaction monitoring (MRM)– skannmodus. Metoden ble brukt til å studere stabilitet av analyttene i fullblod og i stamløsninger i organiske løsningsmidler. For prøveopparbeidelse av tryptaminer i fullblod ble proteinutfelling (PPT) med acetonitril: metanol (85:15, v/v) benyttet. Stabilitetsprøver av tryptaminer i fullblod/organiske løsningsmidler oppbevart i romtemperatur, kjøleskap og fryser ble analysert med UHPLC-MS/MS. Gradienten førte til separasjon av 13 tryptaminer, mens parene 5-MeO-DPT og 5-MeO-DiPT, EPT og 5-MeO-EPT, MiPT og 4-AcO-DET, og 4-OH-DET og 4-OH-MiPT ikke ble kromatografisk separert. Metoden kunne ikke identifisere 4-OH-DET, 5-MeO-DiPT og 5- MeO-DPT. Stabilitetsstudien for 21 tryptaminer i renstoffløsninger viste at ved tilfeller hvor bruksløsningene blir stående i romtemperatur vil de for dette utvalget av tryptaminer allikevel kunne brukes senere, med unntak av de acetoksy (AcO)-substituerte tryptaminene. Stabilitetsstudien for 13 tryptaminer i fullblod viste at tiden mellom prøvetaking og rettstoksikologisk analyse ikke er kritisk for dette utvalget av tryptaminer, med unntak av de AcO-substituerte tryptaminene som bør analyseres uten mer ventetid enn nødvendig.

Tryptamines are a category of New psychoactive substances (NPS) and its occurrence is increasing. In addition, a renewed interest in the medical use of tryptamines may cause increased use in society. Therefore, it is relevant with methods for analysis of tryptamines. An Ultra-High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry (UHPLC-MS/MS) method was developed for the separation and detection of 21 tryptamines. The chromatographic separation of the analytes was performed by reverse phase chromatography in biphenyl column (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm particles) with a temperature of 60 °C, mobile phase flow 0,5 mL/min, injection volume 1,5 μL and gradient elution of 7,5 min with 10 mM ammounim format buffer with pH 3,1 and with methanol as organic modifier. Detection was performed with electron spray ionization (ESI) in positive mode and with multiple reaction monitoring (MRM) scan mode. The method was used for stability studies of the analytes in whole blood and in stock solutions in organic solvents. For sample preparation of tryptamines in whole blood protein precipitation (PPT) with acetonitrile: methanol (85:15, v/v) was used. Stability samples of tryptamines in whole blood/ organic solvents stored in room temperature, refrigerator and freezer was analyzed with UHPLC-MS/MS. The gradient separated 13 tryptamines, while 5-MeO-DPT and 5-MeO-DiPT, EPT and 5-MeO-EPT, MiPT and 4-AcO-DET, and 4-OH-DET and 4-OH-MiPT was not chromatographic separated. The method was not able to identify 4-OH-DET, 5-MeO-DiPT and 5-MeO-DPT. The stability study for 21 tryptamines in organic solvents, showed that in causes when the stock solutions are kept in room temperature they will still be able to be used again later for this selection of tryptamines, with the exception of the acetoxy substituted tryptamines. The stability study for 13 tryptamines in whole blood showed that the time between sampling and forensic toxicologic analysis is not critical for this selection of tryptamines, with the exception of the acetoxy substituted tryptamines that should be analyzed with no more waiting time than necessary.