Termodynamiske studier av binding til kitinaktive enzymer studert ved isotermisk titreringskalorimetri
Master thesis
Permanent lenke
http://hdl.handle.net/11250/225327Utgivelsesdato
2014-11-04Metadata
Vis full innførselSamlinger
- Master's theses (KBM) [890]
Sammendrag
Human chitotriosidase (HCHT) er en av to familie 18 kitinaser, som er produsert av mennesker. Den andre er AMCase. Enzymet er antatt å være en del av det humane immunforsvaret mot sopp og parasitter. Nylig har det blitt vist at nivåene av HCHT bioaktivitet, og proteiner er signifikant økt i sirkulasjon og lunger hos pasienter som lider av systemisk sklerose, og av denne grunn forslått som et terapautisk mål. Det er foretatt en detaljert termodynamisk undersøkelse ved hjelp isoterm titreringskalorimetri med binding av den velkjente familie18 inhibitoren allosamidin til HCHT. Bindingen er vist å være sterkt med en Kd = 0.20 ± 0.03 uM og ΔGr ° = -38,9 ± 0,4 kJ/mol, og drevet av gunstige endringer i entalpi ( ΔHr ° = -50,2 ± 1,2 kJ / mol) og solvatiseringsentropi (- TΔSsolv ° = -41,8 ± 4,4 kJ / mol). Det vises i tillegg en stor straff i konformasjons entropiendring ( - TΔSkonf ° = 43,1 ± 4,2 kJ/mol) .
Human chitotriosidase (HCHT) is one of two active family 18 chitinases produced by humans, the other being acidic mammalian chitinase (AMCase). The enzyme is thought to be part of the innate human defense mechanism against fungal parasites. Recently, it has been shown that levels of HCHT bioactivity and protein are significantly increased in the circulation and lungs of systemic sclerosis patients and for this reason is a suggested therapeutic target. For this reason, we have undertaken a detailed thermodynamic investigation using isothermal titration calorimetry of the binding interaction of HCHT with the well-known family 18 chitinase inhibitor allosamidin. The binding is shown to be strong (Kd = 0.20 ± 0.03 μM and ΔGr° = −38.9 ± 0.4 kJ/mol) and driven by favorable changes in enthalpy (ΔHr° = −50.2 ± 1.2 kJ/mol) and solvation entropy (−TΔSsolv° = −41.8 ± 4.4 kJ/mol). It is accompanied with a large penalty in conformational entropy change (−TΔSconf° = 43.1 ± 4.2 kJ/mol).