Bakterieflora og forekomst av Listeria monocytogenes i lakseindustrien : L.monocytogenes i multi-og duokultur biofilmer under ulike betingelser

Abstract

Intensjonen med oppgaven var å bestemme bakteriefloraen i produksjonsmiljøet for laksefilet og oppnå mer kunnskap om samspill mellom Listeria monocytogenes og disse bakteriene i produksjonsmiljøet. Overflateprøver ble samlet inn fra fire lakseslakterier, og bakterieflora identifisert ved 16S rDNA sekvensering med dyrkningstrinn. Floraen på overflater med utilstrekkelig renhold viste generelt høyere diversitet og gjenspeilet bakteriefloraen på råvarene. Ved ordinært renhold var det mindre diversitet, med Pseudomonas spp. og Acinetobacter spp. som dominerende populasjon. Ved bestemmelse av bakterieflora med 454 pyrosekvensering (uten dyrkningstrinn) ble det observert forskjeller i bakteriesammensetning sammenlignet med bakteriefloraen identifisert med 16S rDNA sekvensering (med dyrkningstrinn). Det ble registrert en mer divers flora og høyere andel Gram-positive bakterier enn ved 16S rDNA sekvensering med dyrkningstrinn. Valg av isolater fra bakgrunnsfloraen til biofilm-forsøk ble basert på følgende kriterier: 1) Identifisert i prøvepunkt med Listeria 2) Dominerende populasjon etter renhold 3) Fantes i flere prøvepunkter. Utvalgte isolater ble dyrket opp i laksebuljong med L. monocytogenes og Listeria sp. i multikultur ved 12 °C (+/- 5 % NaCl) og 20 °C (+/- 5 % NaCl). Listeria monocytogenes og Listeria sp. ble dyrket opp i duokultur biofilm under samme vekstbetingelser. Bestemmelse av biofilm og vekst i suspensjon ble undersøkt ved hjelp av tradisjonelle mikrobiologiske teknikker og 454 pyrosekvensering (ett forsøk). Siden det var få endringer i celletall ved de ulike vekstbetingelsene i multikultur, ble det ikke funnet noen tydelig sammenheng for betydningen av bakgrunnsflora med hensyn på overlevelse av L.monocytogenes i biofilm. Resultatene viste høyere celletall for L. monocytogenes i duokultur enn i multikultur og også større effekter av temperatur og salt. Det var lavere celletall av L.monocytogenes ved tilgang på salt både ved 12 og 20 °C i duokultur. I multikultur fant man ingen effekt av salt og inkuberingstemperatur på celletall av Listeria monocytogenes i biofilm. Listeria sp. dominerte i nærvær av salt, og lå stort sett 2 log over L.monocytogenes i multikultur ved samtlige betingelser, både i suspensjon og i biofilm. Det ble også registrert høyere celletall for Listeria sp. i duokultur, noe som indikerer at Listeria sp. (i dette forsøket) har større konkurranseevne enn L.monocytogenes. Resultatene i labforsøkene tyder på at L.monocytogenes kan etablere seg på overflater i produksjonsmiljøet med færre konkurrenter tilstede og at konkurranse om næringsstoffer kan føre til at bakterien vokser langsommere. Både i produksjonsmiljø og i labforsøk utgjorde L.monocytogenes en liten del av totalfloraen. Det ble vist at det var større sannsynlighet for å finne L.monocytogenes på overflater med smuss og fuktighet.