| dc.description.abstract | Abstract
Post-mortem tenderisation of meat is a complex process, of which all the details are far from understood. Cell death by apoptosis is recently proposed as a novel mechanism in this process. The main aim of this study was to investigate if bovine satellite muscle cells, cultivated in vitro, would induce apoptosis when oxygen was removed from the incubation medium.
Satellite muscle cells was seeded out in Entactin-Collagen IV-Laminin (ECL) coated culture wells and allowed to differentiate before oxygen was removed by adding EC-Oxyrase® to the differentiation medium (DM). Muscle cells were incubated without oxygen for 2h, 4h, 6h and 22h. Samples were analysed by immunofluorescence microscopy, quantitative real-time PCR, western blot, caspase 3/7 assay, caspase 9 assay and viability assay.
Evident signs of actin filament depolymerisation and actin degradation following oxygen removal were observed. Tubulin filaments depolymerised soon after oxygen removal, while the tubulin monomers was unchanged. The mRNA expression of the pro-apoptotic protein Bim increased significantly at all times investigated, as did the mRNA of caspase-independent apoptosis inducing factor (Aif). Mitochondrial membrane potential decreased significantly at 6h after oxygen removal. Concentration of protective Hsp-70 and PARK7 protein seemed to increase transiently, with maximum concentrations at 2h and 4h respectively. Concentration of caspase 9 decreased significantly at all times investigated, with a minimum concentration at 22h. Concentration of caspase 3/7 decreased significantly at 2h and 4h, before increasing gradually from 4h to 22h, ending with a concentration above the control sample. Viability of muscle cells increased at 2h, before decreasing gradually afterwards, ending in a significant decrease at 22h.
In conclusion, the results strongly indicated that satellite muscle cells induced apoptosis when oxygen was removed from the incubation medium, and that the mitochondrion was an important element in the apoptotic event.
Sammendrag
Mørning av kjøtt post-mortem er en kompleks prosess, og det er mange faktorer som påvirker den endelige mørheten i kjøtt. Celledød ved apoptose er nylig foreslått som en av mekanismene som kan påvirke mørningsprosessen. Hovedmålet i denne studien var å undersøke om satellittmuskelceller, dyrket in vitro, ville indusere apoptose når oksygen ble fjernet fra vekstmediet.
Satellittceller fra muskler av storfe ble sådd ut på Entactin-Collagen IV-Laminin (ECL)-belagte dyrkningsbrønner, hvor muskelcellene differensierte før oksygen ble fjernet ved å tilsette EC-Oxyrase® til differensieringsmediet. Muskelcellene ble satt til inkubasjon uten oksygen i 2t, 4t, 6t og 22t. Prøver ble analysert ved immunfluorescens mikroskopi, kvantitativ real-time PCR, western blot, caspase 3/7 assay, caspase 9 assay og viability assay.
Fjerning av oksygen ga tegn på en depolymerisering av actinfilamentene, og at actinmonomerer ble destruert. Tubulinfilamentene ble tydelig depolymerisert etter fjerning av oksygen, men tubulinmonomerene viste ingen tegn på destruksjon. mRNA uttrykk av det pro-apoptotiske proteinet Bim økte signifikant ved alle undersøkte tidspunkter, det samme gjorde mRNA uttrykket til caspaseuavhengig apoptose induserende faktor (Aif). Membranpotensialet til mitokondrier avtok signifikant 6t etter fjerning av oksygen. Konsentrasjonen av de beskyttende proteinene Hsp70 og PARK7 nådde en topp etter henholdsvis 2t og 4t etter fjerning av oksygen, før konsentrasjonen avtok igjen ved lengre inkubasjonstider. Konsentrasjonen av caspase 9 minket signifikant på alle undersøkte tidspunkter, med et minimum etter 22t. Konsentrasjonen av caspase 3/7 minket signifikant etter 2t og 4t, men økte igjen fra 4t til 22t, hvor konsentrasjonen etter 22t var høyere enn i kontrollprøven. Levedyktigheten til muskelcellene økte etter 2t, før den gradvis minket, og til slutt nådde en levedyktighet signifikant lavere enn kontrollen ved 22t.
Resultatene indikerte at satellittmuskelceller induserte apoptose når oksygen ble fjernet fra vekstmediet, og at mitokondriene spilte en viktig rolle i denne prosessen. | no_NO |
