Vis enkel innførsel

dc.contributor.authorRoscher-Nielsen, Live Aamodt
dc.date.accessioned2013-05-06T10:23:12Z
dc.date.available2013-05-06T10:23:12Z
dc.date.issued2013-05-06
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11250/186458
dc.description.abstractBakteriosiner er antimikrobielle peptider produsert av bakterier. Bakteriosiner virker ofte inhiberende på nært beslektede bakterier. Bakteriosinproduserende bakterier har derfor en forsvarsmekanisme i form av et immunitetsgen. Immunitetsgenet er lokalisert på samme operon som kodende gener for bakteriosinpeptidene. Den antibakterielle effekten til bakteriosiner har gjort dem interessante for benyttelse som antibiotika, med bakgrunn for stadig økende grad av antibiotikaresistente bakterier. For å kunne benytte bakteriosiner som antibiotikum eller i samarbeid med antibiotika kreves det mer kunnskap om hvordan bakteriosiner virker. Bakteriosiner kan og benyttes i matindustrien, for å forlenge holdbarheten til matprodukter, som naturlig konserveringsmiddel. Under dette arbeidet fokuseres det på bakteriosinet thermophilin 13, og det antatte immunitetsgenet orf-C. Thermophilin 13 produseres av S. thermophilus. Thermophilin genklusteret består av tre gener, thmA, thmB og orf-C. thmA og thmB er kodende gener for bakteriosinpeptidene som danner bakteriosinet thermophilin 13. For tilegnelse av informasjon om egenskapen til orf-C, ble det utført fremstilling av tre konstrukter, (1) thmA + thmB, (2) thmB + orf-C og (3) orf-C alene. Konstrukt 2 og 3 fremstilles for å kunne undersøke om orf-C kan virke alene eller er avhengig av thmB. Konstrukt 1 fremstilles for å kunne avklare om bakterien krever et tilleggsprotein for immunitet. Forsøket ble utført ved å ligere de tre konstruktene inn i en vektor, med påfølgende transformasjon til en sensitivstamme for deretter å avgjøre eventuelle endringer i sensitiviteten. Den sensitive stammen valgt var L. lactis IL1403. Det ble benyttet to vektorer, pMDP3545 og pMG36e_ABC, dette da den transformasjon med pMSP3545 ikke gav endring i sensitivitet. Benyttelsen av pMG36e_ABC avdekket egenskapen til orf-C som immunitetsgenet mot thermophilin 13, og at genet kan virke alene. Videre ble virkningsmetoden til bakteriosinet undersøkt. Kinetisk analyse av thermophilin 13 viser at bakteriosinet har en celledrepende virkning. En celledrepende effekt vil gjøre det vanskelig for sensitive bakterier og utvikle resistens mot bakteriosinet, da de ikke vil ha muligheten til å vokse opp igjen ved tilstedeværelse av thermophilin 13. pMG36e_ABC viste seg å ha kompatibilitet og til Lb. sakei NCDO 7414. konstrukt 1 (orf-C alene) ble transformert til denne stammen og orf-C gav opphav til immunitet, mot bakteriosinet thermophilin 13. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by bacteria, and inhibit closely related bacteria. A defence mechanism is required by bacteriocin producing bacteria, an immunity gene serves as this mechanism. The immunity gene is located in the same operon as the genes encoding the bacteriocin peptides. The antimicrobial effect of bacteriocin and the increasing antibiotic resistance makes bacteriocin interesting for use as antibiotics. Bacteriocins can also be used in the food industry as a natural preservant. The understanding of bacteriocins mode of action is therefore needed. This work has focused on the bacteriocin thermophilin 13, and its presumed immunity gene orf-C. Thermophilin 13 is produced by S. thermophilus. The thermophilin gene cluster consists of three genes, thmA, thmB and orf-C. thmA and thmB are the coding genes for the bacteriocin peptides. A cloning strategy was developed to gain understanding of the function of orf-C. Three constructs was developed, construct (1) thmA + thmB, (2) thmB + orf-C and (3) orf-C alone. Construct 2 and 3 was developed to clarify if the presumed immunity gene can work alone, or need the help form thmB. Construct 1 was developed to clarify if the bacteriocin producing bacteria need an additional protein to give immunity against the produced bacteriocin thermophilin 13. The three construct was transformed into a sensitive strain. The sensitive strain chosen was L. lactis IL1403. The transformation was executed using two different vectors, pMSP3545 and pMG36e_ABC. Two vectors was used when the transformation of the constructs with the vector pMSP3545 did not show a reduction of sensitivity. When transformed with pMG36e_ABC, construct 2 and 3 revealed that orf-C is the immunity gene, and construct three revealed that orf-C can work alone. As little is known about thermophilin 13, a kinetic analysis of the mode of action was done. The analysis discovered that thermophilin 13 works bactericidal. A bactericidal effect will make it more difficult for sensitive strains to develop resistance against the bacteriocin thermophilin 13, since they will not be able to grow when the bacteriocin is present. The vector pMG36e_ABC has capability with the strain Lb. sakei NCDO 7414 and, construct 1 (orf-C alone) was transformed into the strain. The transformation gave rise to immunity for the sensitive strain Lb. sakei against the bacteriocin thermophilin 13.no_NO
dc.language.isonobno_NO
dc.publisherNorwegian University of Life Sciences, Ås
dc.subjectBakteriosinno_NO
dc.subjectStreptococcus thermophilusno_NO
dc.titleStudiet om immunitet til thermophilin 13, et bakteriosin fra Streptococcus thermophilusno_NO
dc.title.alternativeA study of immunity of thermophilin 13, a bacteriocin produced by Streptococcus thermophilusno_NO
dc.typeMaster thesisno_NO
dc.subject.nsiVDP::Technology: 500::Biotechnology: 590no_NO
dc.source.pagenumber81no_NO


Tilhørende fil(er)

Thumbnail

Denne innførselen finnes i følgende samling(er)

Vis enkel innførsel