Naturlig transformasjon hos Streptococcus pneumoniae

Abstract

Denne oppgaven dreier seg om naturlig transformasjon hos Streptococcus pneumoniae. Fokuset har vært på rensing og aktivitetstesting av CbpD. CbpD er en av hovedkomponentene i fratricidemekanismen som tillater kompetente celler å lysere ikke-kompetente celler eller celler av nært beslektede arter. Et av målene med opgaven var å finne en rensemetode for CbpD som gir rent nok produkt til å oppnå krystallstrutur av dette. Flere metoder ble brukt; DEAE cellulose, ionebyttekromatografi og gelfiltrering. Ingen av disse ga så rent produkt at man kunne oppnå krystallstruktur av CbpD. Derfor ble det festet an His tag til proteinet som muliggjør nye rensemetoder. Det ble funnet av rensing med Zn2+ kolonne ved Äkta Prime plus gav et rent produkt, der dessuten proteinet fortsatt beholdt sin aktivitet. Det ble ikke forsøk å lage krystallstruktur etter denne rensemetoden, men dette er en mulighet for å oppnå dette i senere tid. Det ble utført en rekke tester på aktiviteten til CbpD for å prøve å finne ut mer om hvordan denne er med på å lysere ikke komponente celler. Celler som er komponente uttrykker et immunitetsprotein ComM som beskytter cellen mot angrep fra CbpD. CbpD sin aktivitet ble høyere ved å tilsette katalase og EDTA. Noe som viser at hydrogenperoksid som dannes under cellevekst er med på å hemme aktiviteten til CbpD. Det samme gjelder for toverdige metaller som er til stede i vekstmediet. CbpD binder seg til celleveggen til de ikke komponente cellene for å utføre lysis på disse. Det ble vist at ulike mutasjoner som påvirker oppbyggingen av celleveggen endrer aktiviteten til CbpD. Aktiviteten til CbpD var lavere på alle cellestammene som inneholdt slike mutasjoner enn på en viltype cellevegg. De ulike faktorene som ble testet var færre/flere koliner festet til teikoinsyrene, manglende O-acetylering, manglende N-deacetylering, manglende interpeptidbroer og færre teikoinsyrer i celleveggen.