Investigating the cardiac health of poultry suffering from wooden breast myopathy
Abstract
Årsak og molekylære mekanismer til wooden breast (WB) i kyllinger er fortsatt ikke godt forstått, men studier viser at det ofte utvikler seg til fibrose i skjelettmuskelen. Hos mennesker fører muskeldystrofier som Duchenne muskeldystrofi (DMD) ofte til kardiomyopati og muskel fibrose. Om WB affekterte kyllinger utvikler kardiomyopati er fortsatt uklart. Hovedmålet med denne studien var å undersøke om hjertemuskelen til WB affekterte Ross 308 kyllinger har samme molekylære fingeravtrykk for fibrose som skjelettmuskelen.
Prøver av hjerter til Ross 308 hannkyllinger med mild og alvorlig WB ble tatt ut. Hjerteprøvene ble så kuttet og ventrikkel området ble brukt til analyser av myokardfibrose, da fibrose ofte akkumulerer i dette området ved hjertesykdom. En del av hjerteventrikkelen ble brukt til RNA og proteinisolering, og den andre delen til spektroskopiske analyser. Kvantitativ real-time PCR (qPCR), RNA-Sekvensering (RNA-Seq) og western blotting ble brukt til å analysere genuttrykk og proteiner. NIR og Raman ble brukt til å analysere spektroskopisk profil (fysisk fingeravtrykk) av vann, fett og protein (kollagen) avsetning i prøvene.
Ingen tegn til endring i genekspresjon av fibrose markører som ekstracellulære matriksproteiner som kollagen, små-leucine rike proteoglykaner (SLRPs) og kollagen kryssbindingsenzym lysyl-oksidase (LOX) ble observert på mRNA nivå i alvorlig WB sammenlignet med mild WB. Raman-analysen detekterte ikke en endring i spektral topper av kollagen, som støtter genekspresjonen av kollagen. Genekspresjonen av vevsinhibitor av metalloproteinase 2 (TIMP2) var signifikant nedregulert i alvorlige WB-prøver, mens derimot på protein nivå ved western blot analyser ble denne endringen ikke observert. Videre, var ble ingen forskjeller i genekspresjon av syndekaner som er kjente regulatorer av myokardfibrose, observert mellom mild og alvorlig WB affekterte kyllinger. Ingen forskjeller i genekspresjon av kardiomyocytt markører eller cytoskjelett markører ble funnet. Gensett ontologi berikelsesanalyse (GSEA) av biologiske prosesser påviste at mitokondrielt genuttrykk, oksidative fosforyleringen og ATP-elektrontransportkjeden var betydelig nedregulert i alvorlige WB-prøver. Protein uttrykket av cytokrom c (Cyt c) ble så analysert ved western og ble funnet signifikant økt i alvorlige WB prøver.
En mindre komparativ analyse av kyllinger ble utført mellom to kyllingeraser i tillegg: Hubbard JA787, en saktevoksende rase og Ross 308, en rasktvoksende rase, da rask vekst har blitt koblet til WB myopati i kylling. Når vi sammenlignet hjertene av milde WB affekterte kyllinger av Ross 308 med hjertene av milde WB affekterte til Hubbard JA787, kunne vi se klare forskjeller kjemisk og fysisk sammensetning fra NIR og Raman, og annerledes protein mønster fra SDS-gel elektroforese og Coomassie farging. MMP2 protein ekspresjonen var høyere i Ross 308, mens Cyt c og kardialt Troponin T (cTnT) var like mellom mild WB gruppene av de to hybridene. I tillegg, fra visuell observasjon, Hubbard JA787 hjertene viste fett infiltrasjon i deres høyre og venstre ventrikkel. På en annen, side ble ingen fibrose karakteristikker eller mitokondriell dysfunksjon funnet i Hubbard gruppene av mild og alvorlig WB individer basert på NIR, Raman og western blot analyser.
I konklusjon, resultatene indikerte ikke progresjon til fibrose i Ross 308 WB affekterte kylling hjerter. Derimot, tegn til mitokondriell dysfunksjon ble observert, som mulig kan lede til progresjon av hjerte feil. Fett infiltrasjon i Hubbard JA787 kan indikere hjerteproblemer.