dc.description.abstract | En metode for syrekatalysert metylering av frie fettsyrer (FFA) assistert av mikrobølger ble
utviklet, og sammenlignet med tradisjonelle oppvarmingsmetoder i vannbad. GC-MS ble
benyttet for kvalitativ og kvantitativ analyse av fettsyre metylestere (FAMEs) i tre forskjellige
standarder. Prosent utbytte av hver FAME ble beregnet fra deres respektive arealer mot
arealet til en internstandard. Optimaliseringskurver ble laget for hver metode for å få en
grafisk oversikt over utbyttene til de ulike FAMEs over tid.
I del I av metodeutviklingen var presisjonen i analysene gode for FAMEs fra C14:0. C10:0 og
C12:0 hadde store sprik i resultatene, og enkelte hadde RSD opp mot 100%, så disse ble ikke
tatt med i videre beregninger. De øvrige FAMEs hadde relative standardavvik (RSD) under
10%, men med noen unntak. Best presisjon ble oppnådd ved 70W, med total RSD i metoden
på 1,71%.
I andre del ble en referansestandard med 20 ulike FFA av ulik lengdre og grad av umettethet
derivatisert. Det ble tidlig oppdaget større avvik i resultatene i forhold til forventningene.
Spesielt C22:0, C24:0, C22:1c 13 og C24:1c 15 fikk utbytter betydelig lavere enn forventet.
Avvik ble også oppdaget i enkelte prøver, og da det kun ble preparert 3 paralleller per metode,
kunne ikke presisjonen gjøres rede for. Jevnt over var det lave RSD, de fleste under 10%, men
noen unntak. Ved sammenligning av totalt derivatisert mettet, enumettet, flerumettet samt
totalt FAME i referansestandarder, var presisjonen dårlig med RSD større enn 10%. Det ble
konkludert med at den innkjøpte referansestandarden hadde et annet mengdeforhold enn det
som var oppgitt, og at beregnet vekt var høyere enn reell vekt, så en endelig konklusjon på
metoden kunne ikke bestemmes.
Ved mikrobølgemetode på korte og middels korte FFA, gikk det som forventet. FFA og
FAMEs opp til C14:0 er mer flyktige enn de over, det er sannsynlig at det skjedde mye tap
enten før, under og/eller etter metylering. Presisjonen var kun god før C16:0-C18:0, og på grunn av mye tap av kortere FAMEs ligger utbyttene over 100%. For en mer nøyaktig derivatisering må andre metoder benyttes. A method for acid catalyzed methylation of free fatty acids (FFA), assisted by microwaves
was developed and compared with conventional heating methods by water baths. GC-MS was
used for the qualitative and quantitative analysis of fatty acid methyl esters (FAMEs) in three
different standards. Percentage yield of each FAME was calculated from their respective
chromatogram areas against the area of an internal standard. Optimization curves were made
to get a graphic view of the FAME’s yields over time.
In part I of the method development, the precision of the analysis of FAMEs from C14:0 –
C18:0 were good. C10:0 and C12:0 had a large discrepancy in the results, and some had RSD
near 100%. These were not included in further calculations. FAMEs from C14:0 – C18:0 had
RSD below 10%, with some exceptions. The best precision was obtained at 70W, with a total
RSD of the method of 1,71%, and stable yield at 80 – 95% after 20 seconds with microwave
irradiation.
In the second part of the method development, a reference standard of 20 different FFA with
different lengths and degrees of unsaturation was tested. Four different methods were used. It
was observed rather early significant differences in yields relative to the expectations. In
particular, C22:0, C24:0, C22:1c 13 and C24:1c 15 percentage yields were significantly
lower compared to the other FAMEs, and relative to the expectations. Differences were also
detected in some samples, and since it was only prepared three parallels per method, and only
one injection of each sample, the precision could not be accounted for. Most FAMEs had
RSD below 10%, but some exceptions were discovered. When comparing the average yields
of saturated, monounsaturated and polyunsaturated FAMEs and total average yield of the
reference standard, RSD’s greater than 10% was observed. It was concluded that the
purchased reference standard had a different wt% of the FFA than firstly thought, and that the
calculated weight was higher than the actual weight, so a final conclusion could not be
determined.
As expected, the acid catalyzed methylation of short and medium chain FA is not
recommended. FFA and FAMEs up to C14:0 are more volatile than FFA and FAMEs with
longer hydrocarbon chains, so loss before, during and/or after methylation is likely. The
precision was good only for C16:0-C18:0, and average yields were greater than 100% due to loss of short and medium chain FA. | no_NO |